摘 要：目的：分析中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)活性在骨髓增殖性肿瘤(MPN)中的诊断价值。方法：选取我院2020年11月11日-2021年4月11日收治的 MPN 患者 23 例作为试验组，继发性红细胞增多和继发性血小板增多患者 24 例作为对照组 1，同期健康体检者 26 例作为对照组 2，均应用偶氮偶联法进行 NAP 测定，分析 NAP 阳性率和NAP 积分在 MPN 中的诊断价值。结果：试验组骨髓纤维化(MF)、原发性血小板增多症(ET)、真性红细胞增多症(PV)患者 NAP 阳性率和积分均高于对照组 1 和对照组 2，差异均有统计学意义(P＜0.05)。试验组 CML 患者 NAP 阳性率和积分均低于对照组 1 和对照组 2，差异均有统计学意义(P＜0.05)。试验组中 CML、ET、MF 患者 NAP 阳性率和积分均低于 PV 患者，差异均有统计学意义(P＜0.05)。试验组中慢性粒细胞性白血病(CML)患者 NAP 阳性率和积分均低于 ET、MF 患者，差异均有统计学意义(P＜0.05)。MF 患者 NAP 阳性率和积分均高于 ET 患者，差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论：NAP 活性在 MPN 中具有一定的诊断价值，可作为重要的参考指标，用于该类疾病的鉴别诊断。
关键词：中性粒细胞碱性磷酸酶活性；中性粒细胞碱性磷酸酶积分；骨髓增殖性肿瘤；诊断价值
骨髓增殖性肿瘤(MPN)常由各种因素导致患者骨髓血细胞过度增殖而发病，其病因复杂，在各系统疾病中可引起血细胞继发性增多的疾病种类繁多，故增加了MPN的诊断难度。血栓为MPN常见并发症之一，严重者可导致患者瘫痪甚至死亡，故MPN的早期诊断对治疗、预后均有很大的帮助。骨髓检查结果虽然为确诊MPN的主要诊断标准，但该检查结果耗时长，因此需探讨更为便捷、快速的鉴别诊断方法[1]。中性粒细胞中的碱性磷酸酶(NAP)为成熟粒细胞 S 颗粒释放的一种酶，其活性高低与成熟粒细胞成熟程度及功能相关，因此经常被用于作为细胞功能的衡量手段。随着对 NAP 的深入研究，发现在许多疾病的发生发展过程中，都可能检测到 NAP 活性的升高或降低，而其活性是否在 MPN 中具有特异性改变，值得深入研究，本研究分析 NAP 阳性率和NAP积分在MPN中的诊断价值，现报告如下。
资料与方法
我院自2020年11月11日-2021年4月11日收治的MPN患者23例作为试验组，年龄18～78岁，年龄中位数为48岁；其中慢性粒细胞性白血病(CML)患者5例，占 21.74%，骨髓纤维化(MF)患者5例，占21.74%，原发性血小板增多症(ET)患者8例，占34.78%，真性红细胞增多症(PV)患者5例，占21.74%。继发性红细胞增多患者10例和继发性血小板增多患者 14 例，总计24 例作为对照组 1，年龄 22～76 岁，年龄中位数为39岁；其中继发性红细胞增多患者占41.67%，继发性血小板增多患者占58.33%。同期健康体检者26例作为对照组 2，年龄 21～72 岁，统计年龄中位数为43 岁。三组受检者一般资料比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。本研究通过昆山市第三人民医院伦理委员会批准，入组者知情同意。
试剂与方法：①试剂：台湾贝索公司 NAP 免疫组化检测试剂。②测定方法：用清洁玻片推制新鲜血膜，晾干，用台湾贝索公司 NAP 免疫组化检测试剂进行染色处理，严格按照该试剂说明书操作，成片后在油镜下进行镜检，选择分布均匀的细胞部位，进行 NAP 阳性率测定，并计算 NAP 积分。③NAP 阳性率及积分计算方法：在油镜下进行中性分叶核粒细胞观察，计数 100 个，将其作为判断其阳性率的依据，具体为：(-)：细胞浆内未发现黑色的物质；(+)：细胞浆内发现有棕黑色或是黑色的颗粒，占细胞浆内的 1/4 以内面积；(++)：细胞浆内发现有灰黑色的颗粒，占细胞浆内的 1/2 以内面积；(+++)：细胞浆内发现有致密的黑色沉淀物，占细胞浆内的 3/4 以内面积；(++++)：细胞浆内发现有致密的黑色的颗粒，几乎将胞核完全覆盖；积分计算：(+)细胞数×1+(++)细胞数×2+(+++)细胞数×3+(++++)细胞数×4。
观察指标：观察三组 NAP 阳性率和积分检测结果，并对比试验组内 CML、MF、ET、PV 患者的NAP检测结果，包括 NAP 阳性率及 NAP 积分。统计学方法：数据采用SPSS 21.0进行统计学分析。计数资料以n(%)表示，组间χ2检验，计量以(x±s)表示，组间t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。
结 果
试验组MF、ET、PV患者NAP阳性率和积分均显著高于对照组1和对照组2，差异均有统计学意义(P＜0.05)。试验组CML患者NAP阳性率和积分均低于对照组1和对照组2，差异均有统计学意义(P＜0.05)。试验组CML、ET、MF患者NAP阳性率和积分均显著低于PV患者，差异均有统计学意义(P＜0.05)。试验组MF患者NAP阳性率和积分均显著高于ET患者，差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表1。
表1 三组NAP检测结果对比 (x±s)
讨 论
MPN是肿瘤样增殖症，属于多功能干细胞克隆性疾病，可能由粒细胞、红细胞以及巨核细胞增殖而成，也可能由骨细胞和原纤维细胞增生导致[2]。该类疾病主要包括CML、PV、ET、PMF等，各种疾病在临床表现上存在相当程度的重叠，如都可能出现乏力、盗汗、腹胀、体重减轻，外周血一系或者多系细胞计数的增高，同时可伴有肝脏肿大、脾脏肿大、血栓形成等。
不同的细胞导致了疾病增生速度不同，同时临床症状也有差异，从而导致诊断及鉴别存在困难[3]。同时，因为没有特异性临床症状，明确诊断均需要依靠活检、骨髓细胞以及免疫遗传检查。其中骨髓穿刺、活检意义重大，但为有创操作且耗时较长，寻求更为快捷、简便、准确的检查方法显得十分有意义[4]。
NAP是中性粒细胞成熟颗粒释放的一种酶，根据目前的研究，该酶的活性可与多种因素相关，其中免疫、感染、创伤或者中毒均可能影响该酶活性，而内分泌功能和激素也可能产生影响[5-9]。同时其在碱性环境下可具有杀菌作用，其活性也与机体所感染的病毒种类、严重程度相关[10]。
有研究显示，NAP 可能随着病情的变化增加或者降低活性[11]，患者如果是粒细胞白血病、单核细胞性白血病、红白血病或阵发性睡眠性血红蛋白尿症，其NAP均可能检测到活性降低，而在出血类疾病、细菌感染、手术感染、急性淋巴细胞白血病以及再生障碍性贫血等疾病中，可检测到其活性增高。王锦等[12]收集了200例肿瘤化疗后合并感染患者临床资料，将患者分为真菌组、细菌组和病毒组。对所有患者进行NAP检测，并对各组患者体内NAP水平进行比较，结果发现细菌组患者 NAP 水平最高，真菌组和病毒组患者体内 NAP 水平较低，差异有统计学意义。
梁崇等[13]将 150 例儿童根据病情分为正常对照组、单纯手足口病(HFMD)组及 HFMD 合并感染组，对其分别进行白细胞形态学分类及 NAP 检测，结果发现 HFMD 合并感染组 NAP 阳性率及积分均显著高于正常对照组、单纯 HFMD 组，HFMD 合并感染组患儿经治疗后该组患儿的 NAP 阳性率及积分显著下降，与治疗前比较差异具有统计学意义。这提示通过对 HFMD 合并感染患儿的 NAP 阳性率及积分监测有助于临床医生对疾病的诊断、预后进行判断。NAP 的含量以活性直接标志中性粒细胞的成熟度，因此经常被作为衡量细胞功能的一种手段，并且该实验也相对快速、简便，应用前景广阔[14]。在本研究结果中，试验组 MF、ET、PV 患者 NAP 阳性率和积分均显著高于对照组1和对照组2，试验组CML患者NAP阳性率和积分均显著低于对照组1和对照组2，说明了相较于继发性红细胞增多或者继发性血小板增多的患者，以及健康体检者， MF、ET、PV 患者 NAP 阳性率普遍更高，NAP 积分也表现出了差异，而CML患者的NAP阳性率和积分普遍降低，说明了NAP阳性率和NAP积分在鉴别MPN中有一定的意义，但目前仍然不具有明确诊断的能力，期待后续研究深入观察NAP在种类不同的MPN中的表现。而试验组CML、ET、MF患者的NAP阳性率和积分均低于PV患者。试验组CML患者NAP阳性率和积分低于ET、MF患者， MF患者NAP积分和阳性率高于ET患者。由于CML的NAP阳性率和积分相较于正常对照组1和对照组2更低，且与MF、ET、PV也表现出了显著统计学差异，可以认为，NAP 可以作为诊断CML的优秀诊断指标。
综上所述，NAP 染色简便、快速，且其阳性率与积分在MPN患者中可出现变化，与其他因素引起继发性血细胞增多的患者及正常体检者不同。同时，在不同种类的MPN中也有不同的表现，是诊断与鉴别MPN的重要指标。
